کالریمتری چیست؟
کالریمتری یک تکنیک علمی برای سنجش غلظت مواد بر اساس شدت رنگ آنهاست. این روش بر این اصل استوار است که مقدار جذب نور توسط یک محلول رنگی مستقیماً با غلظت ماده رنگین در آن مرتبط است.
انواع کالریمتری
۱. کالریمتری مرئی (Visible Colorimetry)
اندازهگیری در محدوده مرئی (۳۸۰-۷۵۰ نانومتر) برای محلولهای رنگی
۲. کالریمتری UV
اندازهگیری در محدوده UV برای مواد جاذب UV
۳. اسپکتروفتومتری
نسخه پیشرفته کالریمتری-قابلیت اسکن گستره وسیعی از طولموج
ابزار و لوازم اصلی کالریمتری:
۱. دستگاه کالریمتر/اسپکتروفتومتر
منبع نور: لامپ تنگستن، دوتریم-مونوکروماتور: منشور یا گریتینگ- (Cuvette): محفظه نگهداری نمونه-دتکتور: فوتودیود، فتومالتیپلایر-صفحه نمایش/خروجی داده
۲. (Cuvette)
جنس: شیشهای، کوارتز، پلاستیکی-حجم: معمولاً ۱-۴ میلیلیتر
انواع:
شیشهای: برای محدوده مرئی-کوارتز: برای UV-Vis-پلاستیکی: یکبار مصرف
۳. مواد شیمیایی و معرفها
استانداردهای غلظت مشخص-بافرها برای تنظیم pH-راکتیوها برای ایجاد رنگ-حلالها (آب مقطر، حلالهای آلی)
۴. لوازم عمومی آزمایشگاه
پیپت و نوک پیپت- ارلن، بشر، استوانه مدرج-ویال برای نگهداری نمونهها-پیپت حبابدار برای محلولهای دقیق
مراحل انجام آزمایش کالریمتری:
مرحله ۱: آمادهسازی نمونه
اضافه کردن معرفهای لازم برای ایجاد رنگ-انکوباسیون در زمان و دمای مشخص
مرحله ۲: کالیبراسیون دستگاه
استفاده از بلانک (حلال خالص)-تنظیم صفر دستگاه با بلانک
مرحله ۳: تهیه منحنی کالیبراسیون
اندازهگیری جذب استانداردهای غلظت مشخص-رسم منحنی جذب بر حسب غلظت
مرحله ۴: اندازهگیری نمونهها
خواندن جذب نمونههای مجهول-محاسبه غلظت از روی منحنی کالیبراسیون
کاربردهای کالریمتری:
۱. صنایع غذایی
اندازهگیری پروتئین (روش بیوره)-سنجش قندها-تعیین اسیدیته
۲. صنایع دارویی
کنترل کیفیت داروها-سنجش غلظت مواد موثره
۳. محیط زیست
اندازهگیری فلزات سنگین-سنجش آلایندههای آلی-اندازهگیری نیترات، فسفات
۴. تحقیقات بیولوژیکی
سنجش پروتئین (برادفورد، Lowry)-اندازهگیری DNA/RNA-تستهای آنزیمی
نکات کلیدی برای موفقیت در کالریمتری
۱. آمادهسازی نمونه
نمونه باید شفاف و عاری از ذرات معلق باشد-از حلالهای با کیفیت استفاده شود.
۲. انتخاب کیوت مناسب
برای UV از کیوت کوارتز استفاده شود-کیوتها تمیز و خشک باشند.
۳. کالیبراسیون دقیق
منحنی کالیبراسیون با R² > 0.99-استفاده از استانداردهای تازه
۴. کنترل کیفیت
اندازهگیری duplicates
استفاده از کنترلهای مثبت و منفی
تکنیکهای رایج مبتنی بر کالریمتری-سنجش پروتئین برادفورد
سنجش گلوکز با روش گلوکز اکسیداز-تعیین کلروفیل در گیاهان-سنجش آنزیمهای کبدی


